一．實驗前準備要點：

1.     準備各種實驗儀器及材料（如：37℃恒溫箱，450nm酶標(biāo)儀、高速離心機、高精度加樣器及槍頭等等）

2.     按照生物實驗室安全防護條例，穿著實驗服并佩戴乳膠手套做好防護工作

3.     使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)各試劑取出，平衡至室溫（至少30分鐘）

4.     嚴格按照說明書的操作方法進行操作。說明書以英文說明書為準。

二. 檢測原理: 大鼠緊密連接蛋白(Occludin)ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被緊密連接蛋白（Occludin）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的緊密連接蛋白（Occludin）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

三. 樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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